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    酶聯(lian)免(mian)疫檢測方法(fa)有(you)間接(jie)法(fa)，阻(zu)斷法(fa)，競(jing)爭法(fa)，夾心(xin)(xin)法(fa)等。夾心(xin)(xin)法(fa)中，包被的(de)(de)抗體與酶標抗體，假如(ru)是(shi)單(dan)抗，理論是(shi)不(bu)能用(yong)一樣的(de)(de)，不(bu)外(wai)商品化(hua)的(de)(de)單(dan)抗有(you)可能是(shi)混合單(dan)抗，識別不(bu)同的(de)(de)表位的(de)(de)抗體混在一起，這樣就(jiu)又可以用(yong)一樣的(de)(de)。在今天(tian)的(de)(de)技術下載內(nei)容中，是(shi)恒遠(yuan)為(wei)您(nin)分(fen)享酶聯(lian)免(mian)疫雙抗夾心(xin)(xin)法(fa)檢測攻(gong)略(lve)：

一、標本因素不可忽略

    1.振(zhen)蕩(dang)提取

    將提(ti)取溶劑(ji)加入到(dao)裝有樣(yang)品的具塞容器(qi)中，振蕩(dang)，使提(ti)取溶劑(ji)與(yu)容器(qi)內的樣(yang)品充(chong)分接(jie)觸以深入到(dao)樣(yang)本(ben)組織內部(bu)，提(ti)取待測組分。

    ① 振(zhen)蕩方式：振(zhen)蕩器上進行上下(xia)、往返式振(zhen)蕩、手(shou)搖式上下(xia)振(zhen)蕩。

    ② 在組(zu)織樣本中加入有機溶(rong)劑(ji)之間提取時，應(ying)邊(bian)加邊(bian)振蕩，防止(zhi)組(zu)織凝結成團，不利于(yu)提取。

    3.在(zai)用有(you)機溶(rong)劑提(ti)取(qu)過程中(zhong)，如果出現(xian)乳化現(xian)象(xiang)，解(jie)決的(de)方(fang)法有(you)：①用細頭輕(qing)輕(qing)的(de)攪拌，破壞乳化后(hou)，再重復離(li)心。②再加入適量的(de)提(ti)取(qu)劑，重新振蕩。注意離(li)心后(hou)要保證(zheng)樣本的(de)稀釋倍數不變。

    4.濃縮(suo)

    由于凈(jing)化過程中(zhong)引入的(de)溶劑(ji)，可能會降低(di)待測組分(fen)的(de)濃度或者不適宜直接分(fen)析，需要(yao)去除全部有機(ji)溶劑(ji)。即試劑(ji)盒(he)前處理(li)步驟中(zhong)把樣本在(zai)60℃氮氣(qi)下吹(chui)干，再用復溶液溶解干燥殘留物。

    濃縮(suo)方式：氮氣吹干除雜(za)、壓縮(suo)空氣吹干除雜(za)。

    注意：

    ① 在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質干擾。

    ② 在(zai)吹樣本時，針頭應在(zai)液(ye)面(mian)上空，避免與樣本接觸(chu)，防止(zhi)產(chan)生交(jiao)叉(cha)污染。

    ③ 樣本吹干后應立即(ji)取下(xia)，避免吹的時間(jian)過長，影響zui終檢測結果。

    ④ 不同(tong)的(de)藥物，吹(chui)干后樣(yang)本的(de)保質(zhi)期(qi)不同(tong)，提倡(chang)待樣(yang)本回到室(shi)溫后立即復溶。

    5.凈(jing)化

    經過提取(qu)的(de)(de)(de)(de)待(dai)測組分(fen)中(zhong)(zhong)通常含有一些(xie)會干擾試劑盒中(zhong)(zhong)抗原抗體反應的(de)(de)(de)(de)雜(za)質或者是(shi)含有與待(dai)測物結構相似的(de)(de)(de)(de)雜(za)質。將待(dai)測組分(fen)與雜(za)質分(fen)離的(de)(de)(de)(de)過程(cheng)，我(wo)們稱為試劑盒中(zhong)(zhong)樣本的(de)(de)(de)(de)凈(jing)化(hua)。在我(wo)們現有的(de)(de)(de)(de)試劑盒前處理方(fang)法(fa)中(zhong)(zhong)涉及到的(de)(de)(de)(de)zui常見的(de)(de)(de)(de)凈(jing)化(hua)是(shi)液(ye)液(ye)分(fen)配法(fa)。

二、試劑盒的靈敏度也是關鍵之一

    一般說來，如(ru)果待測(ce)樣本(ben)(ben)中(zhong)目標蛋(dan)白的濃度(du)(du)比(bi)較高，則對靈敏度(du)(du)要求相對小(xiao)一些。如(ru)果待測(ce)樣本(ben)(ben)中(zhong)目標蛋(dan)白的濃度(du)(du)比(bi)較低(di)，則必須(xu)考(kao)慮靈敏度(du)(du)的問題。試(shi)劑盒(he)曲線(xian)上(shang)(shang)的zui小(xiao)濃度(du)(du)是(shi)比(bi)較準確的，低(di)于這個(ge)值(zhi)因為與(yu)曲線(xian)是(shi)個(ge)“S"型結(jie)(jie)構有(you)關，所以結(jie)(jie)果是(shi)有(you)偏(pian)差(cha)的，是(shi)一種估算。再加上(shang)(shang)實驗(yan)誤差(cha)，所以達不(bu)到理想(xiang)的效(xiao)果。建議選擇試(shi)劑盒(he)時，應該看(kan)曲線(xian)上(shang)(shang)zui小(xiao)的濃度(du)(du)值(zhi)，而不(bu)是(shi)試(shi)劑盒(he)上(shang)(shang)寫的靈敏度(du)(du)。

    相對靈敏度=真陽性/(真陽性+假(jia)陰性)×100%

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