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檢測范圍：

25μg/L -900μg/L

使用目的：

本試(shi)劑盒用于測定牛(niu)血(xue)(xue)清、血(xue)(xue)漿及(ji)相關液(ye)體樣本中血(xue)(xue)清淀粉樣蛋白(bai)A (SAA)含量。

實驗原理(li)：

本(ben)試劑盒(he)應用(yong)(yong)雙(shuang)抗(kang)(kang)(kang)體夾心法測(ce)定標本(ben)中牛血清(qing)淀粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)(bai)A (SAA)水平。用(yong)(yong)純化(hua)(hua)的(de)牛血清(qing)淀粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)(bai)A (SAA)抗(kang)(kang)(kang)體包(bao)(bao)被(bei)微孔(kong)板(ban)，制成固相抗(kang)(kang)(kang)體，往(wang)包(bao)(bao)被(bei)單抗(kang)(kang)(kang)的(de)微孔(kong)中依次加(jia)入血清(qing)淀粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)(bai)A (SAA)，再與(yu)HRP標記的(de)血清(qing)淀粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)(bai)A (SAA)抗(kang)(kang)(kang)體結合，形成抗(kang)(kang)(kang)體-抗(kang)(kang)(kang)原-酶(mei)標抗(kang)(kang)(kang)體復(fu)合物，經過徹(che)-底(di)洗滌后加(jia)底(di)物TMB顯色(se)。TMB在HRP酶(mei)的(de)催化(hua)(hua)下轉化(hua)(hua)成藍(lan)色(se)，并在酸的(de)作用(yong)(yong)下轉化(hua)(hua)成最終(zhong)的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣(yang)品中的(de)血清(qing)淀粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)(bai)A (SAA)呈正相關。用(yong)(yong)酶(mei)標儀在450nm波長下測(ce)定吸光度（OD值），通過標準曲線計(ji)算(suan)樣(yang)品中牛血清(qing)淀粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)(bai)A (SAA)濃度。

標(biao)本(ben)要求(qiu) ：

1．標(biao)本(ben)采集后(hou)盡早進行提(ti)取(qu)(qu)，提(ti)取(qu)(qu)按(an)相關(guan)文(wen)獻進行，提(ti)取(qu)(qu)后(hou)應盡快進行實驗。若(ruo)不能(neng)馬上(shang)進行試(shi)驗，可(ke)將(jiang)標(biao)本(ben)放于-20℃保存，但應避(bi)免反復凍融

2．不(bu)能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guo)氧化物酶(mei)的（HRP）活(huo)性。

操作步驟：

1.標(biao)準品(pin)的稀釋：本試劑盒(he)提供原倍(bei)標(biao)準品(pin)一(yi)支，用戶可按照下列圖表在小(xiao)試管中進行稀釋。

800μg/L5號標準品150μl的(de)原倍標準品加入(ru)150μl標準品稀(xi)釋液

400μg/L4號標(biao)準品150μl的5號標(biao)準品加入150μl標(biao)準品稀釋液

200μg/L3號標準品150μl的4號標準品加入(ru)150μl標準品稀釋液

100μg/L2號標(biao)準(zhun)品150μl的3號標(biao)準(zhun)品加(jia)入150μl標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液

50μg/L1號標準品(pin)150μl的2號標準品(pin)加入150μl標準品(pin)稀釋液(ye)

2.加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)：分(fen)別設(she)空(kong)白(bai)孔(kong)(kong)（空(kong)白(bai)對照孔(kong)(kong)不加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)品(pin)及酶標(biao)試劑，其余各步操作相同）、標(biao)準(zhun)(zhun)孔(kong)(kong)、待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)孔(kong)(kong)。在酶標(biao)包被板上標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)準(zhun)(zhun)確加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)50μl，待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)孔(kong)(kong)中先加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)品(pin)稀釋液40μl，然后(hou)再加(jia)(jia)(jia)(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)10μl（樣(yang)(yang)品(pin)最終稀釋度為5倍(bei)）。加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品(pin)加(jia)(jia)(jia)(jia)于(yu)酶標(biao)板孔(kong)(kong)底部，盡(jin)量不觸及孔(kong)(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動混(hun)勻。

3.溫(wen)育：用(yong)封板(ban)膜封板(ban)后置37℃溫(wen)育30分鐘。  

4.配液：將30倍(bei)濃(nong)縮洗滌(di)液用蒸餾水30倍(bei)稀釋后備(bei)用

5.洗滌(di)：小(xiao)心揭掉封板膜，棄去(qu)液(ye)體，甩干，每孔加滿洗滌(di)液(ye)，靜置30秒后棄去(qu)，如此重復5次，拍(pai)干。

6.加(jia)酶：每孔加(jia)入酶標(biao)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育(yu)：操作同(tong)3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯(xian)色：每孔(kong)先加(jia)入顯(xian)色劑A50μl，再加(jia)入顯(xian)色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光(guang)顯(xian)色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃(huang)色）。

11.測(ce)定：以(yi)空白孔調零，450nm波長依序測(ce)量各(ge)孔的吸光度(du)（OD值）。 測(ce)定應在加終止液后(hou)15分鐘以(yi)內進行。

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