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　　微生(sheng)(sheng)物染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)方(fang)法(fa)(fa)(fa)一(yi)般(ban)分為單染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)和復染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)兩(liang)(liang)種。前者用(yong)(yong)(yong)一(yi)種染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)料使微生(sheng)(sheng)物染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)，但不能鑒別(bie)(bie)微生(sheng)(sheng)物。復染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)是(shi)用(yong)(yong)(yong)兩(liang)(liang)種或兩(liang)(liang)種以上染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)料，有協助鑒別(bie)(bie)微生(sheng)(sheng)物的(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)。故(gu)亦稱鑒別(bie)(bie)染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)。常用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)復染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)有革(ge)蘭氏染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)和抗酸(suan)性染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)，此外(wai)還(huan)有鑒別(bie)(bie)細(xi)(xi)胞各部分結構的(de)(de)（如芽胞、鞭毛、細(xi)(xi)胞核等）特殊染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)。食品(pin)微生(sheng)(sheng)物檢驗中(zhong)常用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)是(shi)單染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)和革(ge)蘭氏染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)(fa)(fa)。

１、單染(ran)色法(fa)

　　用(yong)一種染色劑(ji)對涂片進行(xing)染色，簡便易行(xing)，適于進行(xing)微生物的形態觀(guan)察。在(zai)一般情況下，細菌(jun)菌(jun)體(ti)多(duo)帶負(fu)電荷，易于和帶正(zheng)電荷的堿(jian)性染料(liao)(liao)(liao)結合而(er)被染色。因(yin)此，常用(yong)堿(jian)性染料(liao)(liao)(liao)進行(xing)單染色，如美(mei)蘭、孔(kong)雀綠、堿(jian)性復(fu)紅(hong)(hong)、結晶紫和中性紅(hong)(hong)等。若使用(yong)酸(suan)性染料(liao)(liao)(liao)，多(duo)用(yong)剛果紅(hong)(hong)、伊紅(hong)(hong)、藻紅(hong)(hong)和酸(suan)性品紅(hong)(hong)等。使用(yong)酸(suan)性染料(liao)(liao)(liao)時，必(bi)須降低染液的PH值，使其(qi)呈現強酸(suan)性（低于細菌(jun)菌(jun)體(ti)等電點），讓(rang)菌(jun)體(ti)帶正(zheng)電荷，才易于被酸(suan)性染料(liao)(liao)(liao)染色。

單染(ran)色(se)一般要經過涂片、固定、染(ran)色(se)、水洗和干(gan)燥五個步(bu)驟。

染色結果依染料不同而不同：

石碳(tan)酸復紅染色(se)(se)液：著色(se)(se)快，時間(jian)短，菌體呈紅色(se)(se)。　　

美蘭(lan)染色(se)液：著(zhu)色(se)慢(man)，時間長，效果清晰，菌體呈蘭(lan)色(se)。

草(cao)酸銨結晶染(ran)色液：染(ran)色迅速(su)，著色深(shen)，菌體呈紫色。

２、革蘭氏(shi)染色法

革蘭氏染(ran)色(se)法(fa)是細(xi)菌(jun)學中廣(guang)泛(fan)使用的一(yi)種鑒別染(ran)色(se)法(fa)，1884年由(you)丹(dan)麥醫師Gram創立。

       細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)先經堿性(xing)(xing)染(ran)料結晶染(ran)色(se)，而經碘液媒染(ran)后(hou)，用酒精(jing)脫色(se)，在一定(ding)條(tiao)件下有(you)(you)的(de)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)此(ci)色(se)不被脫去，有(you)(you)的(de)可被脫去，因此(ci)可把細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)分為(wei)兩大(da)類，前者叫做革(ge)蘭氏陽性(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)（G+），后(hou)者為(wei)革(ge)蘭氏陰性(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)（G-）。為(wei)觀(guan)察方便，脫色(se)后(hou)再用一種紅色(se)染(ran)料如堿性(xing)(xing)蕃紅等進行復染(ran)。陽性(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)仍(reng)帶紫色(se)，陰性(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)則(ze)被染(ran)上紅色(se)。有(you)(you)芽(ya)胞(bao)的(de)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)絕大(da)多(duo)數和(he)(he)球菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)，以(yi)及所有(you)(you)的(de)放線菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)真菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)都(dou)呈革(ge)蘭氏正(zheng)反應(ying)；弧菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)，螺旋體和(he)(he)大(da)多(duo)數致病性(xing)(xing)的(de)無(wu)芽(ya)胞(bao)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)都(dou)呈現負(fu)反應(ying)。

　　革蘭(lan)氏(shi)陽(yang)性(xing)菌(jun)(jun)和革蘭(lan)氏(shi)陰性(xing)菌(jun)(jun)在(zai)化學組成和生理性(xing)質(zhi)上(shang)有很(hen)多差(cha)(cha)別，染色反應不(bu)一(yi)樣。現在(zai)一(yi)般認為革蘭(lan)氏(shi)陽(yang)性(xing)菌(jun)(jun)體內含有特(te)殊的(de)核蛋白質(zhi)鎂鹽與(yu)多糖(tang)的(de)復(fu)合(he)物(wu)，它與(yu)碘和結(jie)晶(jing)紫的(de)復(fu)合(he)物(wu)結(jie)合(he)很(hen)牢，不(bu)易脫色，陰性(xing)菌(jun)(jun)復(fu)合(he)物(wu)結(jie)合(he)程度底(di)，吸附(fu)染料差(cha)(cha)，易脫色，這(zhe)是(shi)染色反應的(de)主要依據(ju)。

　　另外，陽性(xing)(xing)(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)菌(jun)(jun)(jun)(jun)體等(deng)電點較陰(yin)性(xing)(xing)(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)為低(di)，在相(xiang)同PH條(tiao)件下(xia)進行染色(se)(se)，陽性(xing)(xing)(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)吸附堿性(xing)(xing)(xing)(xing)染料(liao)很多，因(yin)此不(bu)易脫(tuo)去(qu)，陰(yin)性(xing)(xing)(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)則相(xiang)反。所(suo)以染色(se)(se)時(shi)的條(tiao)件要嚴格控制。例如，在強(qiang)堿的條(tiao)件下(xia)進行染色(se)(se)，兩(liang)類菌(jun)(jun)(jun)(jun)吸附堿性(xing)(xing)(xing)(xing)染料(liao)都多，都可(ke)呈正反應(ying)；PH很低(di)時(shi)，則可(ke)都呈負(fu)反應(ying)。此外，兩(liang)類菌(jun)(jun)(jun)(jun)的細胞壁等(deng)對(dui)結(jie)晶紫(zi)—碘復合物的通透(tou)性(xing)(xing)(xing)(xing)也不(bu)一致，陽性(xing)(xing)(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)透(tou)性(xing)(xing)(xing)(xing)小，故不(bu)易被脫(tuo)色(se)(se)，陰(yin)性(xing)(xing)(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)透(tou)性(xing)(xing)(xing)(xing)大，易脫(tuo)色(se)(se)。所(suo)以脫(tuo)色(se)(se)時(shi)間，脫(tuo)色(se)(se)方法也應(ying)嚴格控制。

革蘭氏染(ran)色法一(yi)般包括(kuo)初(chu)染(ran)、媒染(ran)、脫色、復染(ran)等四個步驟，具體操作方法是：

１）涂片固定(ding)。

２）草(cao)酸(suan)銨結晶紫染1分(fen)鐘。

３）自來水沖洗(xi)。

４）加(jia)碘液(ye)覆(fu)蓋(gai)涂面染1分鐘。

５）水(shui)洗，用吸水(shui)紙吸去(qu)水(shui)分。

６）加95%酒(jiu)精數(shu)滴(di)，并(bing)輕(qing)輕(qing)搖動進行(xing)脫色，30秒后(hou)水(shui)洗(xi)，吸去水(shui)分。

７）蕃紅梁色液（稀）染10秒鐘后，自來水沖洗(xi)。干(gan)燥，鏡(jing)檢。

染色的結果，革蘭氏正(zheng)反(fan)應菌(jun)體(ti)都呈紫色，負反(fan)應菌(jun)體(ti)都呈紅色。

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