檢測范圍：
1U/L -24U/L
使(shi)用目(mu)的：
本試劑盒(he)用于測定豬血清、血漿及相關液體樣(yang)本中藍耳病毒（PRRS）含(han)量(liang)。
實驗原理(li)：
本試劑盒應用雙(shuang)抗(kang)(kang)體夾(jia)心法測(ce)(ce)定(ding)標(biao)(biao)本中(zhong)(zhong)豬藍(lan)耳(er)病(bing)毒(du)（PRRS）水平(ping)。用純化(hua)(hua)(hua)的(de)藍(lan)耳(er)病(bing)毒(du)（PRRS）抗(kang)(kang)體包被微(wei)孔(kong)板，制成固相(xiang)抗(kang)(kang)體，往包被單抗(kang)(kang)的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)(zhong)依(yi)次加(jia)入藍(lan)耳(er)病(bing)毒(du)（PRRS），再(zai)與HRP標(biao)(biao)記(ji)的(de)藍(lan)耳(er)病(bing)毒(du)（PRRS）抗(kang)(kang)體結合(he)，形成抗(kang)(kang)體-抗(kang)(kang)原-酶標(biao)(biao)抗(kang)(kang)體復合(he)物，經(jing)過(guo)che底(di)洗滌后加(jia)底(di)物TMB顯色(se)。TMB在(zai)(zai)HRP酶的(de)催化(hua)(hua)(hua)下(xia)轉化(hua)(hua)(hua)成藍(lan)色(se)，并(bing)在(zai)(zai)酸的(de)作用下(xia)轉化(hua)(hua)(hua)成最終(zhong)的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣品中(zhong)(zhong)的(de)藍(lan)耳(er)病(bing)毒(du)（PRRS）呈(cheng)正相(xiang)關。用酶標(biao)(biao)儀在(zai)(zai)450nm波(bo)長下(xia)測(ce)(ce)定(ding)吸光度（OD值），通過(guo)標(biao)(biao)準曲線計算樣品中(zhong)(zhong)豬藍(lan)耳(er)病(bing)毒(du)（PRRS）濃度。
標本(ben)要求(qiu) ：
1．標本采集后(hou)盡早進行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文獻進行(xing)，提(ti)取(qu)后(hou)應盡快進行(xing)實驗。若不能馬上(shang)進行(xing)試(shi)驗，可將標本放(fang)于-20℃保存，但應避免(mian)反復凍融
2．不能檢測(ce)含NaN3的(de)樣(yang)品，因(yin)NaN3抑制(zhi)辣根過氧(yang)化(hua)物酶的(de)（HRP）活性。
操作步驟(zou)：
1.標準品的稀釋：本(ben)試劑盒提(ti)供原倍(bei)標準品一支，用戶可按照下列圖(tu)表在小(xiao)試管中進行稀釋。
24U/L5號標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)150μl的原倍標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)加入150μl標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)稀釋液
12U/L4號標準品(pin)150μl的5號標準品(pin)加入150μl標準品(pin)稀釋液
6U/L3號標準品150μl的(de)4號標準品加入150μl標準品稀(xi)釋液
3U/L2號標(biao)準品150μl的3號標(biao)準品加入(ru)150μl標(biao)準品稀釋液(ye)
1.5U/L1號(hao)標(biao)準(zhun)(zhun)品150μl的2號(hao)標(biao)準(zhun)(zhun)品加(jia)入150μl標(biao)準(zhun)(zhun)品稀釋液
2.加樣(yang)(yang)(yang)：分別(bie)設(she)空白孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)（空白對照孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)不加樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)及酶(mei)標(biao)(biao)試劑，其余各步(bu)操作相(xiang)同）、標(biao)(biao)準(zhun)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)、待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)(biao)包被(bei)板上標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)準(zhun)確加樣(yang)(yang)(yang)50μl，待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)中先加樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然后再加待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)最終稀(xi)釋(shi)度為5倍）。加樣(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加于酶(mei)標(biao)(biao)板孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混勻。
3.溫育(yu)：用(yong)封板膜封板后置37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。
4.配(pei)液(ye)：將(jiang)30倍濃縮洗滌液(ye)用(yong)蒸餾水30倍稀釋后備(bei)用(yong)
5.洗(xi)滌(di)(di)：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti)，甩干(gan)，每孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)(di)液，靜置30秒后棄去，如此(ci)重復(fu)5次，拍(pai)干(gan)。
6.加(jia)(jia)酶：每(mei)孔加(jia)(jia)入酶標試劑(ji)50μl，空白(bai)孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯(xian)色：每(mei)孔先加(jia)入(ru)顯(xian)色劑A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻(yun)，37℃避光顯(xian)色10分(fen)鐘(zhong).
10.終止(zhi)：每(mei)孔加(jia)終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應(ying)（此時藍(lan)色(se)立轉黃(huang)色(se)）。
11.測定：以空白(bai)孔調零，450nm波(bo)長依序測量各孔的吸(xi)光(guang)度(du)（OD值）。 測定應(ying)在加終止液后15分(fen)鐘以內進行(xing)。
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