細(xi)胞復蘇的(de)原(yuan)則
快速(su)融(rong)化(hua)：必須將凍(dong)(dong)存(cun)在(zai)-196℃液氮中的細胞(bao)快速(su)融(rong)化(hua)至37℃，使細胞(bao)外凍(dong)(dong)存(cun)時的冰晶迅(xun)速(su)融(rong)化(hua)，避免冰晶緩慢融(rong)化(hua)時進(jin)入細胞(bao)形成(cheng)再結晶，對細胞(bao)造(zao)成(cheng)損害。
一(yi). 實驗(yan)前準備(bei)：
1.將(jiang)水(shui)浴鍋預熱至(zhi)37℃
2.用75％酒精擦拭(shi)紫(zi)外(wai)線照(zhao)射30min的(de)超凈工作臺(tai)臺(tai)面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒(du)的離(li)心管(guan)、吸管(guan)、培養瓶等。
二．取(qu)出凍存管(guan)：
1.根據細胞(bao)凍存(cun)記(ji)錄按標簽找到所需(xu)細胞(bao)的(de)編號。
2.從液氮罐中取(qu)出(chu)細胞盒，取(qu)出(chu)所需的細胞，同時核對管(guan)外(wai)的編號(hao)。
三．迅速解凍：
1.迅(xun)速將(jiang)凍存管(guan)投入到已經(jing)預熱的(de)水浴鍋中迅(xun)速解凍，并要不斷(duan)的(de)搖動，使(shi)管(guan)中的(de)液體迅(xun)速融化。
2.約1-2min后凍存(cun)管內(nei)液體溶解，取出用酒精棉球擦(ca)拭(shi)凍存(cun)管的外壁，再拿(na)入超凈臺內(nei)。
四.平衡離心(xin)：
用架盤天平(ping)平(ping)衡后，放入離(li)心機中3000r/min 離(li)心3min
五.制(zhi)備細胞懸(xuan)液(ye)：
1.吸(xi)棄上清液。
2.向離心管內加入10ml培養(yang)液，吹打制成細(xi)胞懸(xuan)液。
六.細胞計數：
細(xi)胞濃度以5×105/ml為準(zhun)。
七.培養細(xi)胞：
將(jiang)復合(he)細(xi)胞計(ji)數要求的細(xi)胞懸液分裝入(ru)培(pei)養瓶內，將(jiang)培(pei)養瓶放入(ru)37℃5％CO2的培(pei)養箱內2-4小(xiao)時（或者24-48小(xiao)時）后換液繼續培(pei)養培(pei)養，換液時間由細(xi)胞情況(kuang)而定。
特別注意初(chu)學(xue)者常(chang)犯(fan)的(de)錯誤：
1水浴(yu)鍋未(wei)(wei)預熱(re)或者未(wei)(wei)預熱(re)到37℃。
2.水浴鍋內凍(dong)存(cun)管太多，導致(zhi)傳(chuan)熱不佳，使融化(hua)時間(jian)延長(chang)。
3.離心前忘記平(ping)衡，導致離心機損壞(huai)和(he)細胞丟失(shi)。
4.一次復蘇細胞(bao)過多，忘記更換(huan)吸頭和吸管，導(dao)致細胞(bao)交叉污染。
