檢測范圍：
3pg/ml-150pg/ml
使用(yong)目的：
本試(shi)劑盒(he)用于測定雞血清、血漿(jiang)及相關液(ye)體樣本中二(er)胺(an)氧化(hua)酶(DAO)含量。
實驗原理
本(ben)(ben)試劑(ji)盒(he)應用雙(shuang)抗體(ti)夾心法測定標本(ben)(ben)中雞二(er)胺(an)氧化(hua)酶(mei)(mei)(DAO)水平。用純化(hua)的雞二(er)胺(an)氧化(hua)酶(mei)(mei)(DAO)抗體(ti)包被微孔(kong)板，制成(cheng)固(gu)相抗體(ti)，往包被單抗的微孔(kong)中依(yi)次加入二(er)胺(an)氧化(hua)酶(mei)(mei)(DAO)，再與HRP標記的二(er)胺(an)氧化(hua)酶(mei)(mei)(DAO)抗體(ti)結(jie)合，形成(cheng)抗體(ti)-抗原-酶(mei)(mei)標抗體(ti)復(fu)合物，經過che底洗滌(di)后加(jia)底物(wu)TMB顯色。TMB在HRP酶的(de)(de)催化(hua)下轉化(hua)成藍色，并在酸(suan)的(de)(de)作(zuo)用(yong)下轉化(hua)成最終的(de)(de)黃色。顏(yan)色的(de)(de)深淺和樣品(pin)中的(de)(de)二(er)胺氧(yang)(yang)化(hua)酶(DAO)呈(cheng)正相關。用(yong)酶標儀在450nm波長下測定吸(xi)光度(du)（OD值），通(tong)過標準(zhun)曲線(xian)計(ji)算樣品(pin)中雞二(er)胺氧(yang)(yang)化(hua)酶(DAO)濃度(du)。
標本要求
1．標本(ben)采集后盡早(zao)進(jin)行(xing)提取(qu)，提取(qu)按相(xiang)關文獻進(jin)行(xing)，提取(qu)后應盡快(kuai)進(jin)行(xing)實驗。若不能馬上進(jin)行(xing)試驗，可將標本(ben)放于(yu)-20℃保(bao)存，但應避(bi)免反復凍融
2．不(bu)能檢測(ce)含(han)NaN3的樣品(pin)，因NaN3抑制(zhi)辣(la)根過氧化物酶(mei)的（HRP）活性。
操作步驟
1.標準品(pin)(pin)的稀釋(shi)：本試(shi)劑盒提供原倍標準品(pin)(pin)一支，用戶(hu)可按照下列(lie)圖表在小(xiao)試(shi)管(guan)中進行稀釋(shi)。
120pg/ml5號(hao)標(biao)準品150μl的原(yuan)倍標(biao)準品加入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
60pg/ml4號(hao)標準(zhun)品150μl的(de)5號(hao)標準(zhun)品加入150μl標準(zhun)品稀釋液
30pg/ml3號(hao)標準品(pin)(pin)150μl的4號(hao)標準品(pin)(pin)加入150μl標準品(pin)(pin)稀(xi)釋液
15pg/ml2號標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)150μl的3號標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)加入150μl標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)稀釋液
7.5pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋(shi)液
2.加(jia)(jia)樣(yang)：分(fen)別設(she)空白孔(kong)（空白對照孔(kong)不加(jia)(jia)樣(yang)品(pin)及酶(mei)(mei)標(biao)試劑，其余各(ge)步操作相同）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待(dai)(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶(mei)(mei)標(biao)包被(bei)板上標(biao)準(zhun)品(pin)準(zhun)確加(jia)(jia)樣(yang)50μl，待(dai)(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)中先(xian)加(jia)(jia)樣(yang)品(pin)稀釋液40μl，然后再加(jia)(jia)待(dai)(dai)測樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)最終(zhong)稀釋度為5倍(bei)）。加(jia)(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加(jia)(jia)于酶(mei)(mei)標(biao)板孔(kong)底(di)部，盡量不觸及孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻。
3.溫育(yu)：用封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)后置(zhi)37℃溫育(yu)30分鐘。
4.配液：將(jiang)30倍(bei)（48T的(de)20倍(bei)）濃縮洗(xi)滌液用蒸餾水30倍(bei)（48T的(de)20倍(bei)）稀(xi)釋(shi)后(hou)備用
5.洗滌(di)：小心揭(jie)掉封板(ban)膜，棄(qi)去液體，甩(shuai)干，每(mei)孔加滿洗滌(di)液，靜置30秒后(hou)棄(qi)去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入(ru)酶標試劑(ji)50μl，空白孔除外(wai)。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同(tong)5。
9.顯色(se)(se)：每孔(kong)先加入顯色(se)(se)劑(ji)A50μl，再加入顯色(se)(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混勻，37℃避(bi)光(guang)顯色(se)(se)10分鐘.
10.終(zhong)止：每孔(kong)加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應（此時藍色立轉(zhuan)黃色）。
11.測定(ding)：以空(kong)白孔(kong)調(diao)零，450nm波長依序(xu)測量各孔(kong)的吸光度(du)（OD值）。 測定(ding)應在加終止液后15分鐘以內進行。
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