本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：
5U/L - 180U/L
使用(yong)目的：
本試劑盒用(yong)于測定微生物(wu)樣本中胰(yi)脂肪酶(mei)（PL）活性。
實驗原理
本試(shi)劑盒(he)應用雙抗體夾心(xin)法測(ce)定標(biao)本中胰(yi)脂(zhi)肪酶(mei)(mei)(mei)（PL）水(shui)平。用純化的(de)(de)胰(yi)脂(zhi)肪酶(mei)(mei)(mei)（PL）抗體包(bao)被微(wei)孔(kong)板，制(zhi)成固相抗體，往(wang)包(bao)被單抗的(de)(de)微(wei)孔(kong)中依次(ci)加入(ru)胰(yi)脂(zhi)肪酶(mei)(mei)(mei)（PL），再與HRP標(biao)記的(de)(de)胰(yi)脂(zhi)肪酶(mei)(mei)(mei)（PL）抗體結合，形成抗體-抗原-酶(mei)(mei)(mei)標(biao)抗體復合物，經過che底洗(xi)滌(di)后加(jia)底物TMB顯色(se)。TMB在HRP酶(mei)的催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍色(se)，并在酸的作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成最終的黃(huang)色(se)。顏色(se)的深淺和樣品(pin)中(zhong)的胰脂(zhi)肪(fang)酶(mei)（PL）呈正相關。用(yong)酶(mei)標(biao)儀在450nm波長(chang)下(xia)測定吸(xi)光度（OD值(zhi)），通過標(biao)準(zhun)曲線計算樣品(pin)中(zhong)胰脂(zhi)肪(fang)酶(mei)（PL）活性濃度。
標本(ben)要求
1．標(biao)本采集后盡早(zao)進(jin)行提(ti)(ti)取，提(ti)(ti)取按相關(guan)文獻(xian)進(jin)行，提(ti)(ti)取后應(ying)(ying)盡快進(jin)行實驗。若不能馬上進(jin)行試驗，可(ke)將標(biao)本放于-20℃保(bao)存，但應(ying)(ying)避免反復凍融
2．不能檢測(ce)含NaN3的樣(yang)品，因NaN3抑(yi)制辣根(gen)過氧化物(wu)酶的（HRP）活性。
操作步(bu)驟
1.標(biao)準(zhun)(zhun)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biao)準(zhun)(zhun)品一支，用(yong)戶可按(an)照下(xia)列(lie)圖(tu)表在小試管中進(jin)行稀釋。
160U/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋(shi)液
80U/L 4號標(biao)準(zhun)(zhun)品 150μl的5號標(biao)準(zhun)(zhun)品加入150μl標(biao)準(zhun)(zhun)品稀釋液
40U/L 3號標(biao)準(zhun)品(pin) 150μl的4號標(biao)準(zhun)品(pin)加入(ru)150μl標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋液
20U/L 2號(hao)標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin) 150μl的3號(hao)標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)加入(ru)150μl標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液(ye)
10U/L 1號(hao)標(biao)(biao)準(zhun)品 150μl的2號(hao)標(biao)(biao)準(zhun)品加入150μl標(biao)(biao)準(zhun)品稀釋液
2.加(jia)樣(yang)：分別設空白(bai)孔(kong)（空白(bai)對照孔(kong)不加(jia)樣(yang)品(pin)(pin)及酶標試劑，其(qi)余(yu)各步操作相(xiang)同）、標準(zhun)孔(kong)、待測樣(yang)品(pin)(pin)孔(kong)。在酶標包被板(ban)上標準(zhun)品(pin)(pin)準(zhun)確加(jia)樣(yang)50μl，待測樣(yang)品(pin)(pin)孔(kong)中先加(jia)樣(yang)品(pin)(pin)稀釋液(ye)40μl，然后再加(jia)待測樣(yang)品(pin)(pin)10μl（樣(yang)品(pin)(pin)最(zui)終稀釋度為5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)(pin)加(jia)于酶標板(ban)孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁(bi)，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)晃(huang)動混勻。
3.溫(wen)育：用(yong)封板(ban)膜(mo)封板(ban)后置37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。
4.配液(ye)：將(jiang)30倍(bei)濃縮(suo)洗滌液(ye)用(yong)蒸餾水30倍(bei)稀釋后備(bei)用(yong)
5.洗滌(di)：小心揭掉封板膜，棄(qi)去(qu)液(ye)(ye)體，甩干，每孔加滿(man)洗滌(di)液(ye)(ye)，靜置30秒后棄(qi)去(qu)，如此(ci)重復5次(ci)，拍干。
6.加酶：每孔(kong)加入酶標(biao)試劑(ji)50μl，空白孔(kong)除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯(xian)色：每(mei)孔先加入(ru)顯(xian)色劑A50μl，再加入(ru)顯(xian)色劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此(ci)時(shi)藍色(se)立轉黃色(se)）。
11.測(ce)(ce)(ce)定：以(yi)空白孔(kong)調零(ling)，450nm波長依(yi)序(xu)測(ce)(ce)(ce)量各孔(kong)的(de)吸光度（OD值）。 測(ce)(ce)(ce)定應在加(jia)終止液后15分鐘以(yi)內進行。
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