β2-GP,BIM人β2糖蛋白酶聯免疫試劑盒批發

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人β2糖蛋白（β2-GP）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙(shuang)抗體(ti)一(yi)步夾心法酶(mei)聯免疫(yi)吸附試驗（ELISA）。往預先包被人(ren)β2糖蛋白(bai)（β2-GP）捕(bu)獲抗體(ti)的包被微孔中，依次加(jia)入標(biao)本、標(biao)準品、HRP標(biao)記的檢測(ce)抗體(ti)，經過溫育并(bing)*洗(xi)滌。用底物(wu)TMB顯色，TMB在(zai)過氧化(hua)物(wu)酶(mei)的催化(hua)下轉化(hua)成(cheng)藍色，并(bing)在(zai)酸的作(zuo)用下轉化(hua)成(cheng)zui終(zhong)的黃色。顏色的深(shen)淺和樣品中的人(ren)β2糖蛋白(bai)（β2-GP）呈(cheng)正相關。用酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm 波長(chang)下測(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)（OD 值），計算樣品濃(nong)度(du)。

β2-GP,BIM人β2糖蛋白酶聯免疫試劑盒批發樣本處(chu)理及(ji)要求

1.  血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

標本處理

1.  本(ben)(ben)公司只對(dui)試(shi)劑盒(he)本(ben)(ben)身負責，不對(dui)因使(shi)用(yong)該(gai)試(shi)劑盒(he)所造成的樣(yang)本(ben)(ben)消耗負責，請使(shi)用(yong)者使(shi)用(yong)前充(chong)(chong)分考慮到樣(yang)本(ben)(ben)的可能使(shi)用(yong)量，預留充(chong)(chong)足的樣(yang)本(ben)(ben)。

2.  實驗前應預測標(biao)本含(han)量，如果標(biao)本濃度過(guo)高，應對標(biao)本進行稀釋(shi)，使稀釋(shi)后的(de)(de)標(biao)本符(fu)合(he)試劑盒的(de)(de)檢測范圍，計算時(shi)再乘以(yi)相(xiang)應的(de)(de)稀釋(shi)倍數(shu)。標(biao)本使用0.01mol/L的(de)(de)PBS稀釋(shi)(PH=7.0-7.2)。

3.  若所(suo)檢樣(yang)本(ben)不包(bao)含(han)在說明書所(suo)列樣(yang)本(ben)之中(zhong)，建(jian)議進行預(yu)實驗(yan)驗(yan)證(zheng)其有效性，并(bing)注意(yi)留存樣(yang)本(ben)。

4.  使(shi)用化學(xue)裂解液制備(bei)的組織勻漿(jiang)或細胞(bao)提(ti)取(qu)液可(ke)能(neng)會(hui)由于(yu)某些化學(xue)物質的引入導致(zhi)ELISA實驗(yan)結果(guo)偏(pian)差(cha)。

5.  若樣(yang)本為細胞培養(yang)上清(qing)，因該類樣(yang)本干擾因素較多，如：細胞狀態(tai)、細胞數量、采樣(yang)時間等，所(suo)以(yi)可能存在(zai)檢測不出的情(qing)況。

6.  某些天(tian)然(ran)蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為(wei)與本產品所使(shi)用(yong)的檢測(ce)抗體(ti)(ti)及捕獲抗體(ti)(ti)不匹(pi)配，而不被(bei)檢測(ce)出。

7.  建(jian)議使用新鮮(xian)樣本，保(bao)存(cun)時間過長可能會存(cun)在(zai)蛋白降解或變性導致實驗(yan)結果(guo)偏差。

需要而(er)未提供的試劑和(he)器材

• 酶標儀(yi)（450nm）
• 高精度加樣器及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
• 37℃恒溫(wen)箱
• 蒸餾水(shui)或去離子(zi)水(shui)

試(shi)劑盒組成

備注：

1.  標(biao)準品濃(nong)度依次為：8、4、2、1、0.5、0 ng/mL

2.  經過大(da)量正常標本(ben)(ben)檢(jian)驗(yan)，標本(ben)(ben)的正常濃度值均在(zai)試劑盒提供的檢(jian)測范圍內，實驗(yan)過程(cheng)中直接取50μL樣(yang)(yang)本(ben)(ben)上樣(yang)(yang)即可(ke)。當(dang)有部(bu)分樣(yang)(yang)本(ben)(ben)值超過zui大(da)標準(zhun)品濃度時，可(ke)用樣(yang)(yang)本(ben)(ben)稀釋液將標本(ben)(ben)進行(xing)適當(dang)稀釋后再(zai)進行(xing)實驗(yan)。

注意事(shi)項

• 嚴(yan)格按(an)照(zhao)規定(ding)的(de)時間和溫度進行溫育(yu)以保(bao)證(zheng)準確(que)結(jie)果。所有試(shi)劑(ji)都必須在使用前達(da)到(dao)室(shi)溫20-25℃。使用后立即冷藏(zang)保(bao)存試(shi)劑(ji)。
• 洗板不正確(que)(que)可以導致不準(zhun)確(que)(que)的結果。在加入底物(wu)前確(que)(que)保盡(jin)量(liang)吸干孔內液體。溫育(yu)過程中(zhong)不要(yao)讓微孔干燥(zao)掉。
• 消除板(ban)底殘(can)留的液(ye)體和手指(zhi)印，否則影響OD值。
• 底物(wu)顯色(se)液(ye)應呈無色(se)或很淺的顏(yan)色(se)，已(yi)經變(bian)藍的底物(wu)液(ye)不能(neng)使用(yong)。
• 避免試(shi)劑(ji)和標本的交叉污染以免造成錯誤(wu)結果。
• 在(zai)儲存和(he)溫育時避(bi)免強光直接照射。
• 平衡至(zhi)室(shi)溫后(hou)再打(da)開(kai)密封袋(dai)以(yi)防水(shui)滴凝聚在冷板條上。
• 任何反應(ying)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣(qi)體(ti)。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(ying)試劑的生物活性。
• 不能使用(yong)過期(qi)產品(pin)。
• 如果可能(neng)傳(chuan)播疾病，所有的(de)樣(yang)品(pin)都應管理好，按照規定(ding)的(de)程序(xu)處理樣(yang)品(pin)和檢測裝置。

試劑準(zhun)備

試劑盒從(cong)冷(leng)藏(zang)環境中取(qu)出應(ying)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀(xi)(xi)釋：蒸餾水按1：20稀(xi)(xi)釋，即1份20×洗滌緩沖液加(jia)19份蒸餾水。

操作步驟(zou)

1.  從室溫平衡20min后的(de)鋁箔袋中(zhong)取出所需板條(tiao)，剩余板條(tiao)用自封袋密(mi)封放回4℃。

2.  設置標準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)孔和樣本孔，標準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)孔各加不同濃度的(de)標準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)50μL；

3.  樣本孔中加入待(dai)測樣本50μL；空(kong)白(bai)孔不(bu)加。

4.  除空白孔(kong)外(wai)，標準品孔(kong)和樣本(ben)孔(kong)中每孔(kong)加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的(de)檢測(ce)抗體100μL，用封板膜封住反應孔(kong)，37℃水(shui)浴鍋或恒溫(wen)箱溫(wen)育60min。

5.  棄去(qu)液體，吸(xi)水紙(zhi)(zhi)上拍干(gan)，每孔加滿洗滌(di)液（350μL），靜置(zhi)1min，甩去(qu)洗滌(di)液，吸(xi)水紙(zhi)(zhi)上拍干(gan)，如此重復洗板5次(ci)（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入(ru)底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終(zhong)止液50μL，15min內，在450nm波長處測(ce)定(ding)各孔的OD值(zhi)。

實驗結果計算(suan)

以所測標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品的OD值(zhi)為橫坐標(biao)(biao)，標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品的濃(nong)度值(zhi)為縱坐標(biao)(biao)，在坐標(biao)(biao)紙上或用相關(guan)軟件繪制標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線，并(bing)得(de)到直(zhi)線回歸方程，將(jiang)樣(yang)品的OD值(zhi)代入方程，計(ji)算(suan)出樣(yang)品的濃(nong)度。

試劑盒性(xing)能

1.  檢測范圍(wei)：0.25 ng/mL – 8 ng/mL。

2.  靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 ng/mL。

3.  特異(yi)性：不與其它可溶性結構類似物交(jiao)叉反應。

4.  重(zhong)復(fu)性：板內(nei)變異(yi)系(xi)數小于10% ，板間變異(yi)系(xi)數小于15% 。

說明

1.  由于(yu)現(xian)有(you)條件及(ji)科學技術水平(ping)尚(shang)不能對所有(you)供貨商提供的(de)所有(you)原料進行全面的(de)鑒定(ding)與分析，本(ben)產(chan)品可(ke)能存在(zai)一定(ding)的(de)質量技術風險。

2.  zui終(zhong)的(de)實(shi)驗(yan)結果與試劑(ji)的(de)有效性、實(shi)驗(yan)者的(de)相關(guan)操(cao)作(zuo)以(yi)及當時的(de)實(shi)驗(yan)環境密(mi)切相關(guan)，請務必準(zhun)備充足的(de)標本(ben)備份。

3.  不同(tong)批次的(de)同(tong)一(yi)產品可能(neng)會有少(shao)許差別，如：檢(jian)測限(xian)、靈敏度以及顯(xian)色時間等(deng)，請(qing)依據試(shi)劑盒內(nei)說明(ming)(ming)書進行實(shi)驗操作(zuo)(zuo)，電子版(ban)說明(ming)(ming)書僅作(zuo)(zuo)參考。

4.  只(zhi)(zhi)有(you)全部使(shi)用本試(shi)劑(ji)(ji)盒配(pei)套試(shi)劑(ji)(ji)才(cai)能(neng)保證檢(jian)測(ce)效(xiao)果，不(bu)能(neng)混用其他商的產品。只(zhi)(zhi)有(you)嚴格(ge)遵守本試(shi)劑(ji)(ji)盒的實驗說明才(cai)會得到的檢(jian)測(ce)結果。

問(wen)題解答

若實驗效(xiao)果不好，請及(ji)時對顯色結果拍照，保留(liu)所用板條(tiao)及(ji)未(wei)使(shi)用試劑，并妥善保存，然(ran)后(hou)我公司為您解決(jue)問題。同時您也可以(yi)參(can)考以(yi)下資料(liao)：