大鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中大鼠褪黑素（MT）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷

實驗原(yuan)理

試劑盒采(cai)用雙抗(kang)體一步夾心法(fa)酶(mei)聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yu)先包(bao)被大(da)鼠褪黑素(su)（MT）捕獲抗(kang)體的(de)包(bao)被微孔中(zhong)，依次加(jia)入(ru)標(biao)本、標(biao)準品、HRP標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)體，經過溫育并*洗(xi)滌。用底物TMB顯色，TMB在(zai)(zai)過氧化(hua)物酶(mei)的(de)催化(hua)下(xia)轉化(hua)成藍色，并在(zai)(zai)酸的(de)作用下(xia)轉化(hua)成終的(de)黃色。顏色的(de)深淺和樣品中(zhong)的(de)大(da)鼠褪黑素(su)（MT）呈正(zheng)相關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀在(zai)(zai)450nm 波長下(xia)測(ce)定吸光度(du)（OD 值），計(ji)算樣品濃度(du)。

樣本處理及(ji)要求

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本(ben)溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本(ben)不宜進(jin)行(xing)此項檢測。

需(xu)要而未提供的(de)試劑(ji)和器材(cai)

• 酶標儀（450nm）

• 高精度(du)加樣器及(ji)槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

• 37℃恒溫箱

• 蒸餾(liu)水或去離子(zi)水

試劑盒組成

大鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒備注：

1.  標準品濃度依次(ci)為(wei)：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL

2.  經過(guo)大(da)(da)量(liang)正常標本(ben)檢(jian)驗，標本(ben)的(de)正常濃度值(zhi)均在試劑盒(he)提供的(de)檢(jian)測(ce)范圍內，實驗過(guo)程中直接取50μL樣本(ben)上樣即可。當(dang)有部分樣本(ben)值(zhi)超過(guo)zui大(da)(da)標準(zhun)品(pin)濃度時，可用樣本(ben)稀釋(shi)液將標本(ben)進(jin)行適當(dang)稀釋(shi)后(hou)再進(jin)行實驗。

注(zhu)意事項

• 嚴格按照規定的(de)時(shi)間和溫(wen)度進行(xing)溫(wen)育以保證準確(que)結(jie)果。所有(you)試劑都必須在使用(yong)前(qian)達到室溫(wen)20-25℃。使用(yong)后立即冷(leng)藏保存試劑。

• 洗板不正(zheng)確可以導(dao)致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

• 消(xiao)除板(ban)底殘留(liu)的液(ye)體(ti)和(he)手指印，否則影響OD值(zhi)。

• 底物顯色(se)液應(ying)呈無色(se)或很淺的(de)顏色(se)，已(yi)經變藍的(de)底物液不能使用。

• 避免試劑和標本的交叉污染(ran)以(yi)免造成(cheng)錯(cuo)誤結果。

• 在儲(chu)存和溫育時避免強(qiang)光(guang)直接照射。

• 平衡至室溫后(hou)再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

• 任(ren)何(he)反應試劑(ji)不(bu)能接(jie)觸漂白(bai)(bai)溶劑(ji)或(huo)漂白(bai)(bai)溶劑(ji)所散(san)發的強(qiang)烈氣(qi)體。任(ren)何(he)漂白(bai)(bai)成(cheng)分都會破壞(huai)試劑(ji)盒(he)中反應試劑(ji)的生物活性(xing)。

• 不能使用過期產品。

• 如果可能傳播疾病，所有(you)的樣品都(dou)應(ying)管理好，按照(zhao)規定(ding)的程序(xu)處理樣品和檢測裝置。

試(shi)劑準(zhun)備

試劑(ji)盒從冷藏環(huan)境(jing)中取(qu)出應(ying)在室溫平衡后方可(ke)使用(yong)。

20×洗滌緩沖(chong)液(ye)的稀釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水按1：20稀釋(shi)，即1份20×洗滌緩沖(chong)液(ye)加(jia)19份蒸(zheng)餾(liu)水。

操作(zuo)步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁(lv)箔袋(dai)中(zhong)取出(chu)所需板(ban)條，剩余板(ban)條用自封袋(dai)密封放回4℃。

2.  設(she)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃(nong)度的標準品50μL；

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不(bu)加。

4.  除空白孔外，標(biao)準(zhun)品(pin)孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(mei)（HRP）標(biao)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液(ye)體，吸水(shui)紙上拍干(gan)，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)(xi)滌液(ye)（350μL），靜置(zhi)1min，甩去洗(xi)(xi)滌液(ye)，吸水(shui)紙上拍干(gan)，如(ru)此(ci)重(zhong)復(fu)洗(xi)(xi)板(ban)5次(ci)（也可用洗(xi)(xi)板(ban)機洗(xi)(xi)板(ban)）。

6.  每孔加入底物(wu)A、B各(ge)50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每(mei)孔加入(ru)終止液50μL，15min內(nei)，在(zai)450nm波長(chang)處測定各孔的OD值。

實驗結果計算

以(yi)所測(ce)標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)(de)OD值(zhi)為(wei)橫坐(zuo)標(biao)，標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)(de)濃度(du)值(zhi)為(wei)縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙上或(huo)用(yong)相關軟(ruan)件(jian)繪(hui)制(zhi)標(biao)準(zhun)曲線(xian)，并(bing)得到(dao)直線(xian)回歸方程(cheng)，將樣品(pin)的(de)(de)OD值(zhi)代入(ru)方程(cheng)，計(ji)算出樣品(pin)的(de)(de)濃度(du)。

試劑盒(he)性能

• 檢測范圍：2.5 pg/mL – 80 pg/mL。

• 靈敏度：低(di)檢(jian)測濃度小于0.1 pg/mL。

• 特異(yi)性：不與其它(ta)可溶性結構類(lei)似物交(jiao)叉(cha)反應。

• 重復性(xing)：板(ban)內變異系數(shu)小于10% ，板(ban)間變異系數(shu)小于15% 。

說明

由(you)于(yu)現(xian)有條件及科學技術水平尚不能(neng)對所有供(gong)貨商提供(gong)的所有原料進行全(quan)面的鑒定(ding)與分(fen)析，本產(chan)品可能(neng)存(cun)在一(yi)定(ding)的質量技術風險。

• 終的實驗結果(guo)與試(shi)劑(ji)的有效性、實驗者的相(xiang)關操(cao)作(zuo)以及(ji)當時(shi)的實驗環境密切相(xiang)關，請務必準(zhun)備(bei)(bei)充足的標本備(bei)(bei)份。

• 不同批次的同一產(chan)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏(min)度以及顯(xian)色時間等(deng)，請依據試劑盒內說(shuo)明(ming)書(shu)進行實驗操作(zuo)，網(wang)站電子版(ban)說(shuo)明(ming)書(shu)僅作(zuo)參考。

• 只(zhi)有(you)全部使用本試劑(ji)(ji)盒配套試劑(ji)(ji)才(cai)能(neng)保證(zheng)檢(jian)(jian)測效果(guo)，不(bu)能(neng)混(hun)用其他商的產品。只(zhi)有(you)嚴(yan)格遵守(shou)本試劑(ji)(ji)盒的實驗說明(ming)才(cai)會得到*的檢(jian)(jian)測結果(guo)。

• 本(ben)(ben)公司只對試劑(ji)盒(he)本(ben)(ben)身(shen)負(fu)(fu)責，不(bu)對因使(shi)用該試劑(ji)盒(he)所造成的樣本(ben)(ben)消耗負(fu)(fu)責，請使(shi)用者使(shi)用前(qian)充(chong)分考慮到樣本(ben)(ben)的可(ke)能使(shi)用量(liang)，預留充(chong)足(zu)的樣本(ben)(ben)。

• 使用化學裂(lie)解液制備(bei)的(de)組織勻(yun)漿(jiang)或細(xi)胞(bao)提取液可能會由(you)于某些化學物質的(de)引入(ru)導致ELISA實驗結果偏差。

• 若(ruo)樣(yang)本為細胞(bao)培(pei)養(yang)上清，因該類樣(yang)本干擾因素較多，如：細胞(bao)狀態(tai)、細胞(bao)數量、采樣(yang)時間等，所以可能(neng)存在檢測不出的情(qing)況。

• 某些天然(ran)蛋(dan)白(bai)或重組蛋(dan)白(bai)，包括(kuo)原(yuan)核及真(zhen)核重組蛋(dan)白(bai)，可(ke)能因為與本(ben)產品所(suo)使用的檢測抗體(ti)及捕獲抗體(ti)不匹配，而不被(bei)檢測出(chu)。