小鼠補體3(C3)ELISA試劑盒

使用說明書

本(ben)試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：35μg/ml -1200μg/ml                                                          

規格：96T

使用目的：

本試劑盒用于測定小鼠血(xue)清(qing)、血(xue)漿及相關(guan)液體(ti)樣本中(zhong)補體(ti)3(C3)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠補(bu)體(ti)3(C3)水平。用純化的小鼠補體3(C3)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入補體3(C3)，再與HRP標記的補(bu)體3(C3)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的補(bu)體3(C3)正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠補體3(C3)濃度。

試劑盒組成

標本要求 

1．標本(ben)采集后盡早進(jin)行(xing)提(ti)(ti)取，提(ti)(ti)取按相關文(wen)獻進(jin)行(xing)，提(ti)(ti)取后應(ying)盡快進(jin)行(xing)實驗。若(ruo)不能馬(ma)上進(jin)行(xing)試驗，可將標本(ben)放于(yu)-20℃保存，但應(ying)避免反復凍(dong)融

2．不能檢測(ce)含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制辣根過氧(yang)化(hua)物(wu)酶的(de)（HRP）活性。

小鼠補體3(C3)ELISA試劑盒操作步驟

• 標準品的稀(xi)釋(shi)：本試劑盒提供原倍標準品一(yi)支，用戶可按照下列圖表在(zai)小試管(guan)中進行稀(xi)釋(shi)。

• 加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)：分(fen)別(bie)設空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對照孔(kong)不(bu)加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)品及(ji)(ji)酶標(biao)(biao)試劑，其余(yu)各步(bu)操作相同）、標(biao)(biao)準孔(kong)、待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)品孔(kong)。在酶標(biao)(biao)包被板上標(biao)(biao)準品準確加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)50μl，待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)品孔(kong)中先加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)品稀(xi)釋液40μl，然后再加(jia)(jia)待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)品10μl（樣(yang)(yang)(yang)品終稀(xi)釋度為5倍）。加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)將(jiang)樣(yang)(yang)(yang)品加(jia)(jia)于(yu)酶標(biao)(biao)板孔(kong)底部，盡量不(bu)觸及(ji)(ji)孔(kong)壁，輕輕晃動混勻。
• 溫(wen)(wen)育：用封板(ban)膜封板(ban)后置37℃溫(wen)(wen)育30分鐘。   
• 配(pei)液：將30倍濃縮洗滌液用(yong)蒸餾水30倍稀(xi)釋后備(bei)用(yong)
• 洗滌：小心(xin)揭掉封板膜，棄(qi)(qi)去液(ye)體，甩干，每孔加(jia)滿洗滌液(ye)，靜置30秒后棄(qi)(qi)去，如此(ci)重復5次，拍干。
• 加酶：每(mei)孔加入酶標(biao)試劑(ji)50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同(tong)5。
• 顯色(se)(se)：每孔先加入顯色(se)(se)劑A50μl，再加入顯色(se)(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻(yun)，37℃避光顯色(se)(se)10分鐘.
• 終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液(ye)50μl，終(zhong)止反應（此時(shi)藍色(se)立轉黃色(se)）。
• 測定：以(yi)空白(bai)孔(kong)調零，450nm波長依(yi)序測量(liang)各孔(kong)的吸光度(du)（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以(yi)內進行。

操作程序總結：

計算

  以標(biao)(biao)準物(wu)的(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)為橫坐(zuo)標(biao)(biao)，OD值(zhi)(zhi)為縱(zong)坐(zuo)標(biao)(biao)，在坐(zuo)標(biao)(biao)紙上繪出標(biao)(biao)準曲線(xian)(xian)，根據(ju)樣(yang)(yang)(yang)品的(de)(de)(de)OD值(zhi)(zhi)由標(biao)(biao)準曲線(xian)(xian)查出相(xiang)應(ying)的(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)；再乘以稀(xi)釋倍數(shu)；或用(yong)標(biao)(biao)準物(wu)的(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)與OD值(zhi)(zhi)計算出標(biao)(biao)準曲線(xian)(xian)的(de)(de)(de)直(zhi)線(xian)(xian)回歸方程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣(yang)(yang)(yang)品的(de)(de)(de)OD值(zhi)(zhi)代入方程(cheng)式(shi)，計算出樣(yang)(yang)(yang)品濃(nong)(nong)度(du)，再乘以稀(xi)釋倍數(shu)，即為樣(yang)(yang)(yang)品的(de)(de)(de)實際(ji)濃(nong)(nong)度(du)。

注意事項

1．試劑盒從(cong)冷(leng)藏環境中(zhong)取出應(ying)在室溫平衡(heng)15-30分鐘后(hou)方可(ke)使用，酶標包被(bei)板開封后(hou)如未用完，板條應(ying)裝入密封袋中(zhong)保存。

2．濃洗滌(di)液可能(neng)會有結晶析出(chu)，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(di)時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間Best控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

• 請每次測定的同時做標準曲線，Best做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔First孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
• 封板膜只限一次性(xing)使(shi)用(yong)，以(yi)避免(mian)交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照(zhao)說(shuo)明書的操作進行，試驗結(jie)果判定必須以(yi)酶標(biao)儀(yi)讀數為(wei)準.

8．所有樣品(pin)，洗滌液和(he)各種廢(fei)棄物都應(ying)按傳染物處(chu)理。

9．本試(shi)劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試(shi)劑(ji)盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月